Актуальность. Деструктивные процессы, происходящие в тканях пародонта при хроническом генерализованном пародонтите (ХГП), являются ведущими в течение всего заболевания. В связи с этим, в современной стоматологии актуальной проблемой терапии ХГП является поиск принципов стабильного купирования деструктивных процессов и стимуляции репаративной регенерации.
На сегодняшний день применяются разные варианты комплексного лечения заболеваний пародонта. Важнейшим и неотъемлемым этапом лечебных мероприятий является кюретаж пародонтальных карманов с целью удаления из них поддесневых зубных отложений, распавшейся тканей, грануляций, вегетирующего эпителия, пораженного цемента [4].
В стоматологической практике для этого применяются ручные и электрические инструменты: звуковые скейлеры и ультразвуковые аппараты. Ультразвуковой метод обработки корня зуба является наиболее щадящим по отношению к здоровым тканям и экономит до 50% времени врача. В его основе лежит комбинация четырех различных механизмов: механическая обработка, ирригация, кавитация, акустическая турбуленция [6, 12]. При этом чрезвычайно важен синергизм действия ультразвука и орошающего раствора, подающегося из резервуара аппарата, как для охлаждения, так и для усиления бактерицидного действия ультразвукового кюретажа. С целью орошения наиболее часто применяют дистиллированную воду, физиологический раствор и растворы антисептиков (хлоргексидин, перекись водорода). Не вызывает сомнения, что перечисленные субстанции не способны стабильно купировать деструктивные процессы в тканях пародонта, так как либо не обладают антибактериальным эффектом, либо оказывают раздражающее действие, что провоцирует вторичную альтерацию тканей. С целью стабильного прекращения деструкции тканей оптимально использовать в качестве орошающей жидкости при ультразвуковом кюретаже препарат, обладающий одновременно и щадящим бактерицидным эффектом, и стимулирующим репарацию действием. Такие свойства, по данным литературы, имеют терпенсодержащие вещества [1, 2].
Цель настоящего исследования заключалась в выявлении терапевтического действия при экспериментальном пародонтите препарата «Антиран», применяемого в качестве орошающей жидкости при ультразвуковом кюретаже с последующим трансмембранным диализом в очаг воспаления.
Известно, что препарат «Антиран» включает в свой состав биологически активное вещество (БАВ) растительного происхождения: терпеноид изоборнилацетат, являющийся основным компонентом эфирного масла пихты. Противовоспалительное действие терпеноидов связано с их антагонизмом с гистамином и серотонином, с активацией лейкоцитов и фагоцитоза, стабилизацией клеточных мембран, ингибированием лейкотриена В4 и липооксигеназы, а также с модулированием внутриклеточного уровня ц-АМФ за счет вмешательства в транспорт Са2+ [7, 9]. По данным литературы, изоборнилацетат обладает высокой антибактериальной активностью, подавляет патогенность грамотрицательных микроорганизмов, не уступая в этом антибиотикам, а также проявляет противовоспалительный, антиэкссудативный и цитопротекторный эффекты [1, 2, 5].
Материалы и методы. Эксперименальное исследование проведено на 64 беспородных белых крысах-самках массой 150-170 г. Пародонтит моделировали по методике А.И. Воложина и С.И. Виноградовой [3] путем наложения шелковой лигатуры в десневую бороздку на 7 суток.
После снятия лигатуры всем животным проводили поэтапное лечение. На первом этапе (1-3 сутки) использовали антибиотик (30 % раствор линкомицина гидрохлорида с димексидом в соотношении 9:1), вводимый в ткани пародонта методом трансмембранного диализа [8, 10]. На втором этапе (4-е сутки) животных делили на две группы (по 24 крысы) и проводили ультразвуковой кюретаж. В основной группе животных в качестве орошающей жидкости использовали водный раствор «Антиран» с конечной концентрацией изоборнилацетата 5 %, в группе сравнения - 0,06% раствор хлоргексидина. На третьем этапе (5-14 сутки) всем животным стимулировались репаративные процессы с помощью трансмембранного диализа раствора препарата «Антиран» той же концентрации.
Животных выводили из эксперимента сразу после снятия лигатуры (нулевой срок) и через 3, 7, 14, 21 сутки.
Для исследования иссекали фрагмент нижней челюсти, содержавшей нижние резцы и участок десны между ними. Фрагменты фиксировали в нейтральном 10%-ом формалине, декальцинировали в 7%-ой азотной кислоте, заливали в парафин, изготавливали гистологические срезы и окрашивали их пикрофуксином по Ван Гизону. Анализ препаратов проводили с использованием окулярной сетки и системы анализа изображения с программным обеспечением ImageScopeColor (Москва, 2007) по Г.Г. Автандилову. Определяли объемную долю лейкоцитарного инфильтрата, полнокровных сосудов, отечной жидкости (скопления экссудата), костных фрагментов, новообразованного коллагена и тканей, сохранивших и восстановивших нормальную структуру.
Экспериментальные исследования проводились согласно правилам лабораторной практики при проведении доклинических исследований в РФ (ГОСТ З 51000.3-96 и 51000.4-96).
Полученные данные обработаны статистически стандартными непараметрическими методами (Statistica 8.0) с вычислением критериев Манна-Уитни и Уилкоксона. Данные считались достоверно отличающимися при р<0,05.
Результаты и обсуждение. Трансмембранный диализ линкомицина, который проводился в первые 3 суток экспериментального пародонтита, существенно ограничивал дальнейшую деструкцию тканей пародонта, что обусловлено, по-видимому, эффективным подавлением патогенной микрофлоры (на 80-100% [8, 11]).
После ультразвукового кюретажа с препаратом «Антиран» и двух сеансов его диализа, т.е. на 7 сутки эксперимента, у подопытных животных основной группы доля лейкоцитарного инфильтрата уменьшилась в среднем в 3,3 раза (табл. 1, рис. 1), по сравнению с аналогичным показателем в группе сравнения (p<0,05). При этом лейкоцитарная инфильтрация больше всего снизилась в тканях пародонта на уровне нижней трети корня зуба (в 3,4 раза меньше показателя в предыдущий срок, p<0,05), что оказалось в 23 раза меньше (p<0,05), чем в группе сравнения. Доля нерезорбированных костных фрагментов была в 9,3 раза ниже (p<0,05), чем в группе сравнения, при этом костные отломки наблюдались только в верхней трети корня зуба, в других участках пародонта костные фрагменты отсутствовали. Полнокровие сосудов в нижней трети корня зуба регистрировалось в 2,4 раза меньше (p<0,05), чем в предыдущий срок наблюдения, а по отношению к этому показателю в группе сравнения уменьшилось в 2 раза (p<0,05). В остальных участках пародонта доля полнокровных сосудов оставалась такой же как в группе сравнения. Доля экссудата снизилась в верхней и нижней третях корня зуба и в среднем была меньше в 2,3 раза (p<0,05) по сравнению с животными группы сравнения. Таким образом, у животных основной группы деструктивные процессы прекращались, и вторичная альтерация не пролонгировалась.
В условиях применения «Антирана» (основная группа животных) к 7 суткам эксперимента существенно возросла доля тканей с нормальной структурой (в среднем в 2,3 раза больше, чем у животных, которым проводился ультразвуковой кюретаж с раствором хлоргексидина, p<0,05), а доля незрелого (новообразованного) коллагена в 1,4 раза уменьшилась (p<0,05). Представленные данные свидетельствуют о нарастании темпов репаративной регенерации тканей пародонта (рис. 1).
К 14 суткам наблюдения деструктивные процессы практически завершились, и нерезорбированные костные фрагменты не определялись на всем протяжении пародонта, что указывает на более активное очищение очагов деструкции при использовании препарата «Антиран» в процессе ультразвукового кюретажа, по сравнению с применением хлоргексидина (p<0,05). Доля полнокровных сосудов в тканях пародонта уменьшилась (по сравнению с предшествующим сроком наблюдения): в верхней трети корня зуба в 2,3 раза, в нижней трети в 2,4 раза (p<0,05). Доля экссудата снизилась статистически значимо на протяжении верхней и средней третей (p<0,05, табл. 1). По отношению к этим показателям в группе сравнения, количество полнокровных сосудов уменьшилось в среднем в 1,8 раза (p<0,05), а доля экссудата в 4,0 раза (p<0,05). Необходимо отметить, что в нижней трети пародонта эти показатели снизились максимально - в 8,6 и 13,2 раза соответственно (p<0,05). Доля новообразованного коллагена имела тенденцию к уменьшению, по сравнению с данным показателем у животных, которым проводился ультразвуковой кюретаж с раствором хлоргексидина. Вместе с тем, доля восстановленных и сохраненных тканей значительно возросла на всем протяжении пародонта (p<0,05), максимально в его нижней трети (в 2,5 раза, p<0,05), что указывает на частичное созревание новообразованных коллагеновых волокон и восстановление структуры тканей параллельно с продолжающимся коллагеногенезом.
Рис. 1. Изменение объемной доли (%) структурных элементов тканей пародонта при комплексной терапии экспериментального пародонтита у животных группы сравнения и основной группы.
На 21 сутки наблюдения лейкоцитарная инфильтрация в тканях пародонта полностью отсутствовала, скопления экссудата отмечались только в нижней трети корня зуба, их доля продолжала уменьшаться (в 1,2 раза по сравнению с предыдущим сроком) и достигала значения, в 8,4 раза более низкого, чем в группе сравнения (p<0,05, табл. 1, рис. 1). По отношению к показателям в группе сравнения, доля полнокровных сосудов была меньше в 5,6 раза (p<0,05), количество незрелого коллагена - в 1,4 раза (p<0,05). Вместе с тем, доля тканей с нормальной структурой существенно увеличилась, по сравнению с 14 сутками эксперимента, особенно в верхней трети (в 1,4 раза, p<0,05), составила в среднем 77,7 % и превышала в 1,6 раза этот показатель в группе сравнения (p<0,05, табл. 1).
Таблица 1. Объемная доля (%) структурных элементов пародонта в динамике экспериментального пародонтита у животных основной группы и группы сравнения (n=8)
Примечания: в/3-верхняя треть корня зуба, с/3-средняя, н/3-нижняя трети корня: 1 - отличие от нулевого срока (сразу после снятия лигатуры) (p<0,05), 2 - отличие от показателя у крыс предыдущего срока (p<0,05), 3- отличие от показателя у крыс, которым проведен кюретаж с хлоргексидином в этот же срок (p<0,05).
Представленные данные свидетельствуют о несомненном преимуществе комплексного лечения пародонтита с применением препарата «Антиран» для ультразвукового кюретажа и последующего трансмембранного диализа в очаг воспаления. У животных группы сравнения, получавших препарат «Антиран» только путем транмембранного диализа, вторичная деструкция уменьшалась вдвое, но не завершалась полностью до конца наблюдения, о чем свидетельствует небольшое количество лейкоцитарного инфильтрата, экссудата и полнокровных сосудов, регистрируемых в тканях пародонта и на 21 сутки эксперимента, хотя нерезорбированные костные фрагменты уже не выявлялись.
У животных основной группы, которым заменили хлоргексидин на «Антиран» для орошения пародонтальных карманов в процессе ультразвукового кюретажа, лечение пародонтита оказалось более эффективным и менее продолжительным. Уже на 14 сутки наблюдения признаки деструкции тканей пародонта отсутствовали, лейкоцитарный инфильтрат регистрировался в минимальном количестве (в 6 раз меньше чем в группе сравнения, p<0,05, табл. 1, рис. 1), что свидетельствует о более быстром завершении процессов тканевой деструкции и резорбции продуктов распада. Существенно снижалась сосудистая реакция, и сокращался период воспалительного отека: количество полнокровных сосудов и скоплений экссудата значительно уменьшалось, а к 21 суткам наблюдения накопления отечной жидкости оставались лишь на уровне верхушки корня зуба, тогда как у животных группы сравнения экссудат определялся на всем протяжении тканей пародонта. Репаративное замещение резорбированных участков костной ткани у животных основной группы протекало более активно, на что указывает больший объем восстановленных тканей.
Заключение. На основании полученных данных, можно сделать вывод, что применение раствора «Антиран» в процессе ультразвукового кюретажа и дальнейшей коррекции репарации тканей способствует быстрой элиминации отечной жидкости из очага воспаления, предотвращает пролонгированную вторичную альтерацию тканей и активно стимулирует репаративную регенерацию.