Русский English

Юрченко А.С.

Полиморфизм генов глутатион-s-трансфераз, как маркер эффективного лечения генитального эндометриоза

Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск

Генитальный эндометриоз является одним из самых распространенных гинекологических заболеваний, прочно занимая третье место после воспалительных процессов органов малого таза и миомы матки [1, 2]. По данным разных авторов наружный генитальный эндометриоз встречается у 15-50% женщин репродуктивного возраста независимо от этнической принадлежности и социально-экономических условий [1, 2, 8]. Наряду с общепринятыми теориями происхождения заболевания в последнее время особую актуальность приобретает изучение воздействия экзогенных факторов на развитие и течение эндометриоза [5]. Воздействия на организм женщины полигалогеновых ароматических гидрокарбонов, включающие диоксины и полихлорированные бифенилы, как предполагается, способствуют развитию эндометриоза [3, 5, 7]. Непосредственное воздействие на клетку ксенобиотиков приводит к повреждению дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК), и как следствие нарушению нормальной функции генов и кодируемых ими белков [3, 6]. Действию экзогенных повреждающих факторов противостоит работа системы биотрансформации ксенобиотиков. Ферментами этой системы осуществляется превращение экзогенных различных по химической структуре и эндогенных соединений в более водорастворимые и менее токсичные метаболиты. Ферменты суперсемейства глутатион-S-трансфераз (GST) играют ключевую роль в обеспечении устойчивости клеток к перекисному окислению липидов, свободным радикалам, алкилированию белков, в формировании резистентности к лекарственным препаратам и предотвращении поломок ДНК [3, 6]. Способность метаболизировать ксенобиотики различается у индивидов из-за наличия мутантных вариантов, снижающих или блокирующих экспрессию генов, что во многих исследованиях связывают с повышенным риском развития заболеваний [3, 4, 6]. В настоящее время изучение полиморфизма генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков и его вклада в формирование эндометриоза является приоритетной задачей исследователей во всем мире. Однако, результаты, полученные в разных странах, имеют противоречивый характер. Так, например, работы, проведенные в ряде азиатских стран, не продемонстрировали ассоциации структуры генов с риском развития эндометриоза [7]. Анологичные результаты получены и итальянскими исследователями [8]. При этом в США и других странах Европы определено статистически достоверное влияние делеционных форм генов GST на развитие эндометриоза. Противоречивость данных литературы о взаимосвязи нарушений функций генов GST и развитии эндометриоза побудила нас исследовать полиморфные варианты генов семейства GST у женщин, страдающих генитальным эндометриозом, проживающих на территории Томска и Томской области.

В связи с этим целью работы явилась оценка эффективности лечения генитального эндометриоза в зависимости от полиморфизма генов глутатион-S-трансфераз.

Материал и методы исследования. На базе гинекологической клиники совместно с кафедрой патофизиологии ГБОУ ВПО СибГМУ Минздрава России в 2009-2012 г. проведено клиническое и молекулярно-генетическое обследование и лечение 140 пациенток в возрасте от 19 до 43 лет (средний возраст 30,6±1,2 года) с генитальным эндометриозом. Диагноз эндометриоза был поставлен в результате осмотра брюшины и органов малого таза на наличие эндометриоидных очагов в ходе эндоскопических методов исследования, с последующим гистологическим подтверждением. При поступлении в клинику пациентки предъявляли жалобы на бесплодие (средняя продолжительность 3,6±1,1 лет), которое у 66% пациенток было первичным, а у 34% женщин – вторичным. Кроме того, 74% пациенток жаловались на болевой синдром, 74% – на дисменорею, 38% – на диспареунию, 36% – на нарушение менструального цикла по типу мено- и метроррагии. Наиболее часто, в 85% случаев, во время лапароскопии диагностировались малые формы эндометриоза, в то время как эндометриоидные кисты – в 64%, из них двусторонние в 30% случаев. Частота ретроцервикального эндометриоза составила 13%. У всех женщин было получено добровольное информированное согласие на забор и использование крови для проведения исследований. Кровь для молекулярно-генетических методов исследования получали из кубитальной вены в стандартных условиях у всех пациенток утром в день операции. Стабилизированные образцы крови хранили при –70°С до момента исследования. Выделение ДНК из периферической крови проводили сорбентным методом согласно инструкции, прилагаемой к коммерческому набору «ДНК-сорб-В» («ИнтерЛабСервис», Россия). Типирование образцов по генам GSTT1, GSTM1 проводили при помощи аллельспецифической мультиплексной полимеразной цепной реакции (ПЦР). Амплификацию осуществляли согласно инструкции, прилагаемой к коммерческому набору «АмплиСенс-200-1» («ИнтерЛабСервис», Россия), в пробирках типа «Эппендорф» путём ПЦР, используя структуру праймеров и параметры температурных циклов, описанных в литературе при использовании амплификатора «Терцик МС2» («ДНК-технология», Россия). Для анализа ассоциации маркеров исследуемого гена с эндометриозом сравнивали частоты аллелей и генотипов в группах женщин, используя критерий χ2 с поправкой Йетса на непрерывность. Об ассоциации разных генотипов и аллелей с заболеванием судили по величине отношения шансов (oddsratio (OR)) с расчетом для него 95% доверительного интервала (CI).

Результаты исследования и их обсуждение. После проведения хирургической коррекции всем пациенткам было назначено медикаментозное лечение эндометриоза: 80% женщин получали комбинированные оральные контрацептивы (112 пациенток I группа), 20% – агонисты гонадотропин-рилизинг гормонов (28 пациенток II группа). Эффективность выбранной терапии оценивали по частоте купирования болевого синдрома и наступления беременности в течение 12-18 месяцев с момента проведения оперативного вмешательства. У пациенток II группы в 64% (18 пациенток) случаях болевой синдром значительно уменьшился, либо полностью купировался, что наблюдалось сравнительно чаще, чем у женщин I группы – 33% (37 пациенток), (р≤0,05). Частота наступления беременности не превышала 30%. Наиболее часто – в 43% случаев (12 пациенток) – беременность наступала у пациенток II группы, в то время, как в группе сравнения – в 26% (29 пациенток), (р≤0,05). В связи с сохраняющимся бесплодием, болевым синдромом и наличием признаков эндометриоидной кисты по данным ультразвукового исследования органов малого таза через 3-6 месяцев после проведения медикаментозного лечения эндометриоза в 5% случаев (7 пациенток) проводилась повторная оперативная лапароскопия. Таким образом, анализ эффективности лечения позволил установить, что наиболее результативным методом медикаментозной терапии эндометриоза после предварительной хирургической коррекции оказалось назначение агонистов гонадотропин-рилизинг гормонов (рис. 1). На следующем этапе исследования в зависимости от эффективности лечения все обследованные женщины были разделены на 2 группы: в первую вошли 55 пациенток (39%), медикаментозное лечение которых оказалось эффективным; во вторую группу – 85 женщин (61%), не отметивших улучшений после проведенной терапии. Анализ частоты распределения вариантных генотипов генов ферментов второй фазы биотрансформации ксенобиотиков GSTТ1 и GSTМ1 у пациенток с эндометриозом в зависимости от эффективности медикаментозного лечения позволил выявить статистически значимые отличия. Обращала на себя внимание значимо высокая частота встречаемости делеционного генотипа 0/0 генов GSTТ1 и GSTМ1 (80,00%, р=0,005 и 61,18%,р=0,049 соответственно) у пациенток с генитальным эндометриозом, лечение которых было неэффективным (табл. 1).

Рис. 1. Эффективность медикаментозного лечения пациенток с гени-тальным эндометриозом (звездочкой отмечены достоверные различия р≤0,05)

Рис. 1. Эффективность медикаментозного лечения пациенток с генитальным эндометриозом (звездочкой отмечены достоверные различия р≤0,05)

Таблица 1. Распределение генотипов генов GSTТ1 и GSTМ1 у пациенток с генитальным эндометриозом в зависимости от эффективности лечения (в абс. знач. и %).

Таблица 1. Распределение генотипов генов GSTТ1 и GSTМ1 у пациенток с генитальным эндометриозом в зависимости от эффективности лечения (в абс. знач. и %)

Примечание: р - уровень статистической значимости различий частоты генотипов между группами пациенток с генитальным эндометриозом (эффективное и неэффективное лечение), χ2 – стандартный критерий Пирсона для сравнения частоты генотипов.

Ген GSTТ1 кодирует аминокислотную последовательность фермента θ1глутатион-S-трансферазы, содержащегося в эритроцитах и участвующего в очистке организма от многих ксенобиотиков. Ген GSTМ1 кодирует аминокислотную последовательность фермента μ1глутатион S-трансферазы, которая играет существенную роль в инактивации электро-фильных органических веществ. Наибольшая экспрессия гена GSTM1 наблюдается в печени, почках и желудке. В случае делеции гена GSTТ1 (частота в популяции 16-25%) и гена GSTМ1 (частота в популяции 40-45%) образуются укороченные белковые продукты без выраженной ферментативной активности, что приводит к дисбалансу глутатион-опосредованной биотрансформации ксенобиотиков [4]. В результате значительно повышается восприимчивость клеток к повреждающим воздействиям факторов окружающей среды, что способствует более длительному сохранению в организме активных промежуточных метаболитов, обладающих мутагенными свойствами [3, 6]. В частности, нарушается инактивация эстрогенов и происходит накопление высокоактивных промежуточных метаболитов, лежащих в основе рецидивирования и неэффективного лечения эндометриоза [8].

Таким образом, эффективность медикаментозной терапии эндометриоза коррелирует с особенностями полиморфизма генов ферментов второй фазы биотрансформации ксенобиотиков – «функционально неполноценные» генотипы 0/0 GSTТ1 и 0/0 GSTМ1 (OR=2,17 и OR=1,89 соответственно) ассоциированы с низкой эффективностью медикаментозного лечения генитального эндометриоза. Целесообразно назначение медикаментозной терапии эндометриоза с учетом особенностей генетического полиморфизма организма пациентки. Тестирование генов глутатион S-трансфераз может рассматриваться не только как метод выявления женщин с наследственной предрасположенностью к генитальному эндометриозу, но и как способ прогнозирования результатов эффективности гормонотерапии и выработки стратегии медикаментозной терапии. Ферменты детоксикации являются перспективной терапевтической мишенью и представляет большой интерес для патогенетически обоснованного лечения эндометриоза.


Список использованных источников:

1. Генетические аспекты гинекологических заболеваний/ Л.В. Адамян, В.А. Спицын, Е.Н. Андреева. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2008. - 192 с.

2. Эндометриоз: диагностика и лечение/ А.И. Ищенко, Е.А. Кудрина. - М.: МИА, 2008. - 176 с.

3. Полиморфизм генов биотрансформации ксенобиотиков GSTM1, GSTT1, CYP2D6, вероятных маркеров риска онкологических заболеваний, в популяции коренных этносов у русских северной Сибири/ Р.П. Корчагина, Л.П. Осипова, Н.А. Вавилова, Н.А. Ермоленко, Е.Н. Воронина, М.Л. Филипенко// Вавиловский журнал генетики и селекции. - 2011. – Т. 15. - № 3. - С. 448-461.

4. Полиморфизм генов глутатион-S-трансфераз в популяциях русского населения европейской части России/ А.В. Хрунин, Д В. Хохрин, С.А. Лимборская// Генетика. - 2008. - №. 44. - С. 1429-1434.

5. Caserta D., Mantovani A., Marci R., Fazi A., Ciardo F., La Rocca C., Maranghi F., Moscarini M. Environment and women's reproductive health// Hum. Reprod. Update. - 2011. - №. 17 (3). - P. 418-433.

6. Josephy P.D. Genetic Variations in Human Glutathione Transferase Enzymes: Signifi-cance for Pharmacology and Toxicology// Hum. Genomics Proteomics. - 2010. - №. 2. - Р. 1-14.

7. Kim S.H., Choi Y.M., Lee G.H., Hong M.A., Lee K.S., Lee B.S., Kim J.G., Moon S.Y. Association between susceptibility to advanced stage endometriosis and the genetic polymor-phisms of aryl hydrocarbon receptor repressor and glutathione-S-transferase T1 genes// Hum. Reprod. - 2007. - №. 22(7). - Р. 1866-1870.

8. Vichi S., Medda E., Ingelido A.M., Ferro A., Porpora M.G., Resta S., Abballe A., Nisticò L., De Felip E., Gemma S., Testai E. Glutathione transferase polymorphisms and risk of endometriosis associated with polychlorinated biphenyls exposure in Italian women: a gene–environment interaction// Fertility and Sterility. - 2012. - V. 97, №. 5. - Р. 1143-1151.

В журнале «Врач-аспирант»:

9. Газазян М.Г., Пономарева С.В., Иванова Т.С., Волкова Л.В. Морфологические характеристики регенерации эндометрия при различных методах реабилитации при неразвивающейся беременности// Врач-аспирант, №2.1(51), 2012. – С. 222-227

10. Катасонова З.А. Прогнозирование и профилактика развития послеабортного эндометрита// Врач-аспирант, №1(44), 2011. – С. 77-82.

11. Кублинский К.С., Наследникова И.О., Евтушенко И.Д., Агаркова Т.А. Функциональный полиморфизм генов интерлейкинов при бесплодии, ассоциированном с генитальным эндометриозом// Врач-аспирант, №6.2(55), 2012. – С. 298-304


31.03.2013 20:11:00