Русский English

Скиданенко-Левина О.В., Махмутходжаев А.Ш.

Полиморфизм гена интерлейкина-10 и предрасположенность к прогрессированию папилломавирусной инфекции у женщин города Томска

Сибирский государственный медицинский университет, г.Томск

Рак шейки матки (РШМ) многие годы занимает второе место по частоте среди злокачественных новообразований органов репродуктивной системы у женщин, уступая лишь раку молочной железы. Являясь наиболее частой онкогинекологической патологией, РШМ является серьезной проблемой здравоохранения не только в нашей стране, но и во всем мире [1]. В то же время согласно резолюции IX Всемирного конгресса по патологии шейки матки РШМ условно относится к полностью предотвратимым заболеваниям, в случае если выявляется на стадии предраковых заболеваний или начальной формы рака [2]. Реальной профилактикой цервикального рака является своевременное выявление и лечение предраковых заболеваний, к которым относятся цервикальные интраэпителиальные неоплазии(CIN).

В экономически развитых странах в результате активного внедрения цитологического скрининга достигнуто существенное снижение смертности от инвазивного рака шейки матки. Тем не менее, проблема ранней диагностики, прогноза и лечения CIN и РШМ по-прежнему остается актуальной проблемой современной медицины. К числу важных вопросов данной проблемы относится роль различных факторов, с которыми ассоциированы возникновение и прогрессия цервикальной интраэпителиальной неоплазии.

Основным этиологическим фактором развития CIN и РШМ является вирус папилломы человека (ВПЧ) «высокого онкогенного риска». В практически 99,7% материала биопсий, подтверждающих РШМ, выявляются различные типы ВПЧ [3].

Вирус папилломы человека относится к эпителиотропным вирусам, поражающим преимущественно базальный слой эпителия. Репликация вирусной ДНК и экспрессия ранних вирусных белков происходит в ядре эпителиальных клеток при их дифференцировке. Этот процесс оканчивается образованием зрелой вирусной частицы на последней стадии дифференцировки эпителиальной клетки.

Вирус способен существовать в свободной эписомальной и в интегрированной форме. Переход в интегрированную форму связан с включением вирусной дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) в геном человека. К злокачественной трансформации способна только интегрированная форма ВПЧ, при которой происходит неконтролируемая продукция двух ранних вирусных белков, являющихся онкогенами – Е6 и Е7. Эти белки взаимодействуют с эндогенными клеточными регуляторными белками p53 и pRb). Результатом этого взаимодействия является дизрегуляция цикла клеточной прогрессии, приводящая в дальнейшем цервикальному канцерогенезу [4]. Наибольший удельный вес прогрессирования диспластических процессов шейки матки, ассоциированных с ВПЧ-инфекцией, наблюдается при инфицировании вирусами типов 16 и 18 [5].

Однако далеко не всегда ВПЧ-инфекция развивается по описанному варианту и соответственно не всегда приводит к развитию рака шейки матки. По данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), при отсутствии отягощающих факторов в течение 3 лет поражения эпителия шейки матки, ассоциированные с ВПЧ, в 50-62% наблюдений подвергаются регрессии. По сведениям учёных Калифорнийского университета (США) у 70% молодых ВПЧ- инфицированных женщин ДНК ВПЧ перестаёт определяться на протяжении 24 мес.

К числу отягощающих факторов относятся такие факторы как раннее начало половой жизни, большое число половых партнеров, курение, злоупотребление алкоголем, возраст женщины. Среди эндогенных модифицирующих факторов в генезе малигнизации эпителия шейки матки наиболее важной представляется роль иммунной системы, в частности характер иммунного ответа при взаимодействии ВПЧ и макроорганизма.

Можно предположить, что ключевую роль играют локальные иммунные процессы, а именно цитокиновая регуляция локального иммунного ответа на ВПЧ. Нарушение данной регуляции, проявляющееся в преобладании противовоспалительных цитокинов над провоспалительными, возможно, повышает вероятность персистенции вируса в организме, что может способствовать формированию неопластических процессов. Интерлейкин-10 (ИЛ-10) является одним из основных иммунорегуляторных противовоспалительных цитокинов [6]. Полиморфизм гена ИЛ-10 G1082A влияет на производство ИЛ-10 in vivo и in vitro [7]. По данным Stanczuk GA, Sibanda EN, Perrey C et al. существует значимая связь полиморфизма G1082A гена ИЛ-10 с раком шейки матки [8], в то время как Zoodsma M, Nolte IM, Schipper M et al. сообщают об отсутствии такой связи [9]. Таким образом, корреляция полиморфизма гена ИЛ-10 с риском развития рака остается спорной.

Представляет интерес влияние ИЛ-10 на риск прогрессии от латентной формы ВПЧ до CIN.

Целью настоящего исследования является оценка частоты полиморфизма A1082G гена ИЛ-10 у женщин с латентной формой ВПЧ-ассоциированного поражения шейки матки (носительством ВПЧ), и женщин с CIN, ассоциированной с папилломавирусной инфекцией.

Материал и методы. В исследование вошли 120 женщин с ВПЧ-ассоциированным поражением шейки матки, которые были разделены на 2 группы с использованием метода «случай-контроль». В 1 группу были включены 60 женщин с латентной формой, во 2 группу - 60 женщин с CIN. Все женщины имели ВПЧ 16 типа.

Выделение форм ВПЧ-поражения выполнено на основании классификация ВПЧ-ассоциированных поражений нижнего отдела гениталий [10].

Диагноз CIN установлен на основании гистологического заключения согласно классификации Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ). Из 60 женщин с CIN у 21 женщины была CIN I, у 22 женщин - CIN II и у 17 женщин - CIN III. Диагноз латентной формы выставлен на основании отсутствия клинических, морфологических, цитологических изменений при наличии ДНК ВПЧ в клетках эпителия шейки матки.

ДНК вируса папилломы человека 16 типа определялась методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием типичных праймеров (L1C1/L1C2/ L1C2M) для области L1 вируса папилломы человека [11].

Для исследования полиморфизма гена ИЛ-10 использовалась венозная кровь, полученная утром натощак, по методике Perrey C, Turner SJ et al. [12].

Статистическая обработка произведена с использованием «Statistica 8.0». Результаты считались статистически значимыми при р<0,05.

У всех женщин, включенных в исследование, было получено Письменное информированное согласие на участие в исследовании.

Результаты и обсуждение. В ходе выполнения работы был выполнен анализ частоты полиморфизма G1082A гена ИЛ-10 у женщин с разными клиническими формами ВПЧ-инфекции.

При оценке частоты полиморфизма гена ИЛ-10 выявлена более высокая встречаемость аллеля G в положении 1082 у женщин с CIN (57%) в сравнении с женщинами с латентной формой ВПЧ-поражения (27%) (табл. 1). При этом гомозиготное состояние по G аллелю при CIN встречалось чаще, чем при латентной форме ВПЧ-инфекции (33% и 10%, соответственно, p<0,05). Гетерозиготное состояние было выявлено в 23% у женщин с CIN, что было выше, чем у женщин с латентной формой ВПЧ-инфекци (16,7%, p<0,05). (табл. 2).

Полиморфизм G1082A гена интерлейкина-10 включает в себя три генотипа AA, GA и GG, из которых генотип AA ассоциирован с низким синтезом ИЛ-10, в то время как генотипы GA и GG связаны с умеренной и высокой продукцией, соответственно [13].

Таблица 1. Частота мутации гена ИЛ-10 у женщин обследованных групп

Таблица 1. Частота мутации гена ИЛ-10 у женщин обследованных групп

Таблица 2. Частота вариантов полиморфизма гена ИЛ-10 у женщин обследованных групп

Таблица 2. Частота вариантов полиморфизма гена ИЛ-10 у женщин обследованных групп

Интерлейкин-10 относится к группе противовоспалительных цитокинов и является ингибитором активности Т-хэлперов 1 типа (Th1-клеток). Он синтезируется Т-хэлперами 2 типа (Th2-клетками), моноцитами и цитотоксическими Т-клетками. Основная функция ИЛ-10 состоит в угнетении синтеза цитокинов Th1-клетками и в снижении активности макрофагов, в том числе продукции провоспалительных цитокинов. В то же время ИЛ-10 является синергистом ИЛ-4 и повышает синтез IgM и IgA.

Таким образом, ИЛ-10 является важным регулятором иммунного ответа, подавляющим активность макрофагов и Th1-клеток, в результате чего осуществляется цитотоксический ответ макроорганизма, а также обеспечивает реализацию некоторых биологических эффектов Th2-клеток, что способствует развитию гуморальной составляющей иммунного ответа, обусловливая аллергическую реактивность организма.

Но избыток ИЛ-10 ведет к снижению противоинфекционной защиты и развитию хронических инфекций.

Также полагают, что ИЛ-10 способствует стимуляции опухолевого роста в результате ингибирования T-клеточного иммунного ответа [14].

Кроме исследованного полиморфизма имеется ряд полиморфизмов, также связанных с единичными нуклеотидными заменами в гене ИЛ - 10. Наиболее хорошо из них изучены полиморфизмы промоторной области гена, такие как C-819Т (транзиция) и C-592A (трансверсия).

Таким образом, учитывая тот факт, что генотип AA ассоциирован с низким синтезом ИЛ-10, а генотипы GA и GG связаны с умеренной и высокой продукцией, соответственно, можно ожидать снижения иммунологической защиты на локальном уровне при наличии мутации в гене ИЛ-10 в результате повышения его концентрации в цервикальной слизи, и как следствие - повышение частоты развития неоплазий шейки матки.

Заключение. На основании полученных данных можно предположить, что генный полиморфизм G1082A ИЛ-10 может служить маркером генетической предрасположенности к формированию и прогрессированию CIN на фоне инфицирования ВПЧ.

Изучение взаимосвязи между генными полиморфизмами ключевых цитокинов локального иммунного ответа в шейке матки и установление связи с развитием CIN и рака шейки матки может позволить понять механизмы персистенции ВПЧ и иммунологического контроля над вирусом при его внедрении в эпителий. А в дальнейшем эта взаимосвязь позволит разработать и внедрить в клиническую практику более совершенные скрининговые мероприятия для выявления женщин с высоким риском развития CIN и рака шейки матки.


Список использованных источников:

1. Аксель Е.М. Статистика злокачественных опухолей женских половых органов/ В кн.: «Клинические лекции по онкогинекологии». – М.: МЕДпресс-информ, 2009.- С.12-19.

2 IX всемирный конгресс по патологии шейки матки и кольпоскопии/ Н.И. Кондриков, В.Н. Прилепская// Акуш. и гин.-1996.- №6.- С.51-52.

3. Zur Hausen H. Papillomaviruses causing cancer: evasion from host-cell control in carcinogenesis// J Natl Cancer Inst 2000; 92: 690-698.

4. Thomas M.C., Chiang C.M. E6 oncoprotein represses p53-dependent gene activation via inhibition of protein acetylation independently of inducing p53 degradation// Mol Cell 2005; 18: 251-264.

5. Monsenego J., Boch F., Coursaget P. et a. Cervical Cancer Control Priorities and new directions// Int J Cancer 2004; 108: 332-333

6. Rousset F., Garcia E., Defrance T., Pe´ronne C., Vezzio N., Hsu D.H. et al. Interleukin 10 is a potent growth and differentiation factor for activated human B lymphocytes// Proc Natl Acad Sci USA 1992; 89: 1890– 3.

7. Turner D.M., Williams D.M., Sankaran D., Lazarus M., Sinnott P.J., Hutchinson I.V. An investigation of polymorphism in the interleukin-10 gene promoter// Eur J Immunogenet 1997; 24: 1–8

8. Stanczuk G.A., Sibanda E.N., Perrey C., Chirara M., Pravica V., Hutchinson I.V. et al. Cancer of the uterine cervix may be significantly associated with a gene polymorphism coding for increased IL-10 production// Int J Cancer 2001; 94: 792– 4.

9. Zoodsma M., Nolte I.M., Schipper M., Oosterom E., van der Steege G., de Vries E.G. et al. Interleukin-10 and Fas polymorphisms and susceptibility for (pre) neoplastic cervical disease// Int J Gynecol Cancer 2005; 15 (Suppl. 3): 282–90.

10. Прилепская В.Н., Роговская С.И., Межевитинова Е.А. Кольпоскопия: Практическое руководство. – М.: ГЭОТАР–Медиа, 2000.

11. Yoshikawa H., Kawana T., Kitagawa K., Mizuno M., Yoshikura H., Iwamoto A. Detection and typing of multiple genital human papillomaviruses by DNA amplification with consensus primers// Jpn J Cancer Res 1991; 82: 524–31.

12. Perrey C., Turner S.J., Pravica V., Howell W.M., Hutchinson I.V. ARMS-PCR methodologies to determine IL-10, TNF-alpha, TNF-beta and TGF-beta 1 gene polymorphisms// Transpl Immunol 1999; 7: 127–8.

13. Matsumoto K., Oki A. et al. Interleukin-10 21082 Gene Polymorphism and Susceptibility to Cervical Cancer Among Japanese Women// Jpn J Clin Oncol 2010; 40 (11) 1113–1116.

14. Кадагидзе З.Г. Цитокины// Практическая онкология. – 2003. – Т.4. – №3. – С. 131–139.


01.09.2013 18:09:00