Плоскоклеточный рак гортани среди опухолей головы и шеи занимает первое место и встречается в 95-96% случаев злокачественных новообразований. В настоящее время для оценки клинического поведения заболевания используются традиционные клинико-анатомические критерии: TNM-классификация, гистологическая дифференцировка и наличие метастазов в лимфатические узлы. Однако даже комплексная оценка стандартных критериев не всегда позволяет оценить биологическое поведение опухоли. По этой причине в мире ведется поиск новых независимых иммуногистохимических прогностических маркеров.
Образование опухоли - это комплексный процесс, молекулярные механизмы которого недостаточно понятны. В этой цепи достаточно хорошо изучена сверх-экспрессия циклина D1. Он экспрессируется геном PRAD-1 (CCND1), который впервые описан как кандидат в онкогены в 1991 г. Motokura и авт. [13]. Так было выявлено и идентифицировано три гена семейства циклинов. Это CCND1 в хромосоме 11q13, CCND2 – 12p13, CCND3 в 6p21. CCND1 и CCND2 признаны в развитии злокачественных опухолей, в то время как CCND3 - нет. Циклин D1 связывается и активируется специфической циклин-зависимой киназой (CDK4 и CDK6), которая играет ключевую роль в прогрессии клетки во время клеточного цикла. В нормальном состоянии комплекс циклин D1 и CDK4 или CDK6 фосфорилирует ген ретинобастомы (продукт опухолевого гена-супрессора ретинобластомы, RB1). Дерегуляция комплекса циклин-циклин зависимой киназы (амплификация, сверх-экспрессия) ведёт к неконтролируемой пролиферации и началу трансформации нормальной клетки в опухолевую. При сверх-экспресии циклин D1 ускоряет G1-фазу, что ведёт к нестабильности генома и увеличивает амплификацию генов в других локусах. Амплификация гена и/или экспрессия белка циклина D1 связана с метастазами в лимфатические узлы, клинической стадией, рецидивами и плохим прогнозом [7,10,11,14,19]. Однако ряд исследователей этой связи не обнаружили [12,17,18]. Некоторые авторы считают, что циклин D1 является потенциальным маркером опухолевой прогрессии [6,16].
Целью исследования явилось изучить экспрессию циклина D1 в плоскоклеточном раке гортани и выявить связь между сверх-экспрессией исследуемого маркера и известными клинико-патологоанатомическими параметрами.
Материалы и методы. Материалом для иммуногистохимического исследования служили парафиновые срезы 122 случаев плоскоклеточного рака, полученных во время операций от больных, леченных в Республиканском клиническом онкологическом диспансере с 1994 по 2007 гг. При оценке каждого случая учитывались возраст больных, локализация, распространение опухоли (Т-стадия), наличие или отсутствие метастазов и рецидивов, гистологическая структура и стадия опухоли в соответствии с системой TNM (табл. 1). Степень последней оценивали по стандартным критериям [3].
Таблица 1. Распределение больных по полу, возрасту, клинической стадии, гистопатологической градации и локализации опухоли в гортани.
Примечание: * - опухоль занимает два и более отдела в полости гортани.
Для исследования использовалось антитело против циклина D1 (DAKO, клон SP4, разведение 1:50). В каждом случае вычислялся процент окрашенных клеток. Для этого были подсчитаны 1000 клеток в 10 полях зрения с увеличением х400 [1]. Учитывались только интенсивно окрашенные ядра опухолевых клеток (рис. 1). Отрицательной реакцией считалась от 0 до 5%. Для визуализации применяли систему детекции UltraVision с DAB Plus хромогеном (LabVision Corp.). Статистическую обработку данных проводили при помощи программы SPSS 13.0, используя тест Манна-Уитни для двух независимых выборок. Уровень значимости (р) принимали равным 0,05.
Рис. 1. Окрашивание ядер антителами против циклина D1 в плоскоклеточном раке гортани. Система детекции: UltraVision с DAB Plus хромогеном, х400
Результаты. Исследуемая группа включала в себя 120 мужчин и 2 женщины в возрасте от 36 до 79 лет (средний возраст - 59,3). Положительная реакция обнаружена в 85 случаях (69,7%). 66 больных прожили 5 и более лет. 55 – умерли. Экспрессия циклина D1 у выживших больных обнаружена в 40 случаях, а у умерших - в 45 случаях. (р=0,114). Результаты экспрессии представлены в табл. 2. Не обнаружены статистически значимые различия между экспрессией циклина D1 и возрастом, клинической и Т-стадией, локализацией опухоли, наличием метастазов в лимфатических узлах, рецидивами и степенью гистологической дифференцировки (G).
Обсуждение. По литературным данным сверх-экспрессия циклина D1 в раке головы и шеи обнаружена в 18-83% случаев [2,8,9,10,11,19]. Такой широкий разброс объясняется тем, авторы использовали различные критерии оценки и шкалы реакции. Положительной реакцией считалось окрашивание ядер любой степени интенсивности, а качестве отрицательных значений использовался минимальный процент окрашенных опухолевых клеток от 5 до 50%. Нами обнаружена экспрессия в 69,7% случаев.
Ряд исследователей не обнаружили статистически значимой связи между экспрессией циклина D1 и демографическими и клинико-патологичес-кими параметрами рака гортани [4,11,12,17].
Другие авторы, напротив, обнаружили корреляцию экспрессии циклина D1 с некоторыми параметрами плоскоклеточного рака гортани. Так Krecicki с соавт. [6] показали связь с локализацией, а Pignataro с соавт. [15] обнаружили связь экспрессией циклина D1 с курением и алкоголем, распространенностью опухоли, метастазированием в лимфатические узлы, рецидивами и клинической стадией. Связь с последней обнаружена Y.-Y. Zhang с соавт. [18]. [10,19] выявили связь экспрессии исследуемого маркера с надсвязочными опухолями, метастазами, распространенностью и запущенной клинической стадией. В своей статье мы не обнаружили связи с локализацией, T- и клинической стадиями, наличием метастазов в лимфатические узлы и гистологической степенью дифференцировки опухоли (G).
Таблица 2. Некоторые клинико-морфологические и прогностические показатели и экспрессия циклина D1
В нашем исследовании обнаружена сверх-экспрессия циклина D1 в группе больных, проживших менее пяти лет, но без явной статистической корреляции (р=0,114). Подобные результаты обнаружены Vielba с соавт., 2003 [17]. Однако, Y.-Y. Zhang с соавт. [18] показали, что снижение экспрессии исследуемого маркера коррелирует с увеличением периода выживаемости.
Таким образом, сверх-экспрессия циклина D1 не коррелирует с важнейшими клинико-патологоанатомическими параметрами рака гортани. Данный факт позволяет утверждать, что экспрессия данного маркера не является важным прогностическим маркером в течении плоскоклеточного рака гортани.