Русский English

Кулагин Р.Н.

Изучение экспрессии циклина D1 в плоскоклеточном раке гортани

Казанский государственный медицинский университет

Плоскоклеточный рак гортани среди опухолей головы и шеи занимает первое место и встречается в 95-96% случаев злокачественных новообразований. В настоящее время для оценки клинического поведения заболевания используются традиционные клинико-анатомические критерии: TNM-классификация, гистологическая дифференцировка и наличие метастазов в лимфатические узлы. Однако даже комплексная оценка стандартных критериев не всегда позволяет оценить биологическое поведение опухоли. По этой причине в мире ведется поиск новых независимых иммуногистохимических прогностических маркеров.

Образование опухоли - это комплексный процесс, молекулярные механизмы которого недостаточно понятны. В этой цепи достаточно хорошо изучена сверх-экспрессия циклина D1. Он экспрессируется геном PRAD-1 (CCND1), который впервые описан как кандидат в онкогены в 1991 г. Motokura и авт. [13]. Так было выявлено и идентифицировано три гена семейства циклинов. Это CCND1 в хромосоме 11q13, CCND2 – 12p13, CCND3 в 6p21. CCND1 и CCND2 признаны в развитии злокачественных опухолей, в то время как CCND3 - нет. Циклин D1 связывается и активируется специфической циклин-зависимой киназой (CDK4 и CDK6), которая играет ключевую роль в прогрессии клетки во время клеточного цикла. В нормальном состоянии комплекс циклин D1 и CDK4 или CDK6 фосфорилирует ген ретинобастомы (продукт опухолевого гена-супрессора ретинобластомы, RB1). Дерегуляция комплекса циклин-циклин зависимой киназы (амплификация, сверх-экспрессия) ведёт к неконтролируемой пролиферации и началу трансформации нормальной клетки в опухолевую. При сверх-экспресии циклин D1 ускоряет G1-фазу, что ведёт к нестабильности генома и увеличивает амплификацию генов в других локусах. Амплификация гена и/или экспрессия белка циклина D1 связана с метастазами в лимфатические узлы, клинической стадией, рецидивами и плохим прогнозом [7,10,11,14,19]. Однако ряд исследователей этой связи не обнаружили [12,17,18]. Некоторые авторы считают, что циклин D1 является потенциальным маркером опухолевой прогрессии [6,16].

Целью исследования явилось изучить экспрессию циклина D1 в плоскоклеточном раке гортани и выявить связь между сверх-экспрессией исследуемого маркера и известными клинико-патологоанатомическими параметрами.

Материалы и методы. Материалом для иммуногистохимического исследования служили парафиновые срезы 122 случаев плоскоклеточного рака, полученных во время операций от больных, леченных в Республиканском клиническом онкологическом диспансере с 1994 по 2007 гг. При оценке каждого случая учитывались возраст больных, локализация, распространение опухоли (Т-стадия), наличие или отсутствие метастазов и рецидивов, гистологическая структура и стадия опухоли в соответствии с системой TNM (табл. 1). Степень последней оценивали по стандартным критериям [3].

Таблица 1. Распределение больных по полу, возрасту, клинической стадии, гистопатологической градации и локализации опухоли в гортани.

Таблица 1. Распределение больных по полу, возрасту, клинической стадии, гистопатологической градации и локализации опухоли в гортани

Примечание: * - опухоль занимает два и более отдела в полости гортани.

Для исследования использовалось антитело против циклина D1 (DAKO, клон SP4, разведение 1:50). В каждом случае вычислялся процент окрашенных клеток. Для этого были подсчитаны 1000 клеток в 10 полях зрения с увеличением х400 [1]. Учитывались только интенсивно окрашенные ядра опухолевых клеток (рис. 1). Отрицательной реакцией считалась от 0 до 5%. Для визуализации применяли систему детекции UltraVision с DAB Plus хромогеном (LabVision Corp.). Статистическую обработку данных проводили при помощи программы SPSS 13.0, используя тест Манна-Уитни для двух независимых выборок. Уровень значимости (р) принимали равным 0,05.

Рис. 1. Окрашивание ядер антителами против циклина D1 в плоскоклеточном раке гортани. Система детекции: UltraVision с DAB Plus хромогеном, х400

Рис. 1. Окрашивание ядер антителами против циклина D1 в плоскоклеточном раке гортани. Система детекции: UltraVision с DAB Plus хромогеном, х400

Результаты. Исследуемая группа включала в себя 120 мужчин и 2 женщины в возрасте от 36 до 79 лет (средний возраст - 59,3). Положительная реакция обнаружена в 85 случаях (69,7%). 66 больных прожили 5 и более лет. 55 – умерли. Экспрессия циклина D1 у выживших больных обнаружена в 40 случаях, а у умерших - в 45 случаях. (р=0,114). Результаты экспрессии представлены в табл. 2. Не обнаружены статистически значимые различия между экспрессией циклина D1 и возрастом, клинической и Т-стадией, локализацией опухоли, наличием метастазов в лимфатических узлах, рецидивами и степенью гистологической дифференцировки (G).

Обсуждение. По литературным данным сверх-экспрессия циклина D1 в раке головы и шеи обнаружена в 18-83% случаев [2,8,9,10,11,19]. Такой широкий разброс объясняется тем, авторы использовали различные критерии оценки и шкалы реакции. Положительной реакцией считалось окрашивание ядер любой степени интенсивности, а качестве отрицательных значений использовался минимальный процент окрашенных опухолевых клеток от 5 до 50%. Нами обнаружена экспрессия в 69,7% случаев.

Ряд исследователей не обнаружили статистически значимой связи между экспрессией циклина D1 и демографическими и клинико-патологичес-кими параметрами рака гортани [4,11,12,17].

Другие авторы, напротив, обнаружили корреляцию экспрессии циклина D1 с некоторыми параметрами плоскоклеточного рака гортани. Так Krecicki с соавт. [6] показали связь с локализацией, а Pignataro с соавт. [15] обнаружили связь экспрессией циклина D1 с курением и алкоголем, распространенностью опухоли, метастазированием в лимфатические узлы, рецидивами и клинической стадией. Связь с последней обнаружена Y.-Y. Zhang с соавт. [18]. [10,19] выявили связь экспрессии исследуемого маркера с надсвязочными опухолями, метастазами, распространенностью и запущенной клинической стадией. В своей статье мы не обнаружили связи с локализацией, T- и клинической стадиями, наличием метастазов в лимфатические узлы и гистологической степенью дифференцировки опухоли (G).

Таблица 2. Некоторые клинико-морфологические и прогностические показатели и экспрессия циклина D1

Таблица 2. Некоторые клинико-морфологические и прогностические показатели и экспрессия циклина D1

В нашем исследовании обнаружена сверх-экспрессия циклина D1 в группе больных, проживших менее пяти лет, но без явной статистической корреляции (р=0,114). Подобные результаты обнаружены Vielba с соавт., 2003 [17]. Однако, Y.-Y. Zhang с соавт. [18] показали, что снижение экспрессии исследуемого маркера коррелирует с увеличением периода выживаемости.

Таким образом, сверх-экспрессия циклина D1 не коррелирует с важнейшими клинико-патологоанатомическими параметрами рака гортани. Данный факт позволяет утверждать, что экспрессия данного маркера не является важным прогностическим маркером в течении плоскоклеточного рака гортани.


Список использованных источников:

1. Автандилов А.Г. Медицинская морфометрия. - М.: Медицина, 1990. 384 с.

2. Горбань Н.А. Клинико-морфологическая и иммуногистохимическая характеристика и прогностические критерии плоскоклеточного рака гортани: Автореф. дис. … канд. мед. наук. – М., 2008, 25 с.

3. Справочник по классификации злокачественных опухолей. – СПб.: Медакадемия, 2007. 432 с.

4. Fracchiolla N.S., Pruneri G., Pignataro L. et al. Molecular and immunohistochemical analysis of the bcl-1/cyclin D1 gene in laryngeal squamous cell carcinomas: correlation of protein expression with lymph node metastases and advanced clinical stage// Cancer. – 1997. – v.79. – P.1114-1121.

5. Imoto M., Doki Y., Jiang W., et al Effects of cyclin D1 overexpression on G1 progression-related events// Exp Cell Res. – 1997. – v. 236. – P.173–180.

6. Krecicki T., Smigiel R., Fraczek M. et al. Studies of the cell cycle regulatory proteins P16, cyclin D1 and retinoblastoma protein in laryngeal carcinoma tissue// J Laryngol Otol. – 2004. – v. 118. – P. 676-80.

7. Kyomoto R., Kumazawa H., Toda Y. et al. Cyclin-D1-gene amplification is a more potent prognostic factor than its protein over-expression in human head-and-neck squamous-cell carcinoma// Int J Cancer. – 1997. – v. 74. – P. 576-81.

8. Lukas J., Aagaard L., Strauss M. et al. Oncogenic aberrations of p16INK4/CDKN2 and cyclin D1 cooperate to deregulate G1// Control Cancer Res. – 1995. – v. 55(21). – P. 4818–4823.

9. Medema R.H., Herrera R.E., Lam F. et al. Growth suppression by p16ink4 requires functional retinoblastoma protein// Proc Natl Acad Sci USA. – 1995. – v. 92(14). – P. 6289–6293.

10. Michalides R.J., van Veelen N.M., Kristel P.M. et al. Overexpression of cyclin D1 indicates a poor prognosis in squamous cell carcinoma of the head and neck// Arch Otolaryngol Head Neck Surg. – 1997. – v. 123. – P. 497-502.

11. Mielcarek-Kuchta D, Olofsson J, Golusinski W. p53, Ki67 and cyclin D1 as prognosticators of lymph node metastases in laryngeal carcinoma // Eur Arch Otorhinolaryngol. – 2003. – v. 260. – P. 549-54.

12. Morshed K., Skomra D., Korobowicz E. et al. An immunohistochemical study of cyclin D1 protein expression in laryngeal squamous cell carcinoma// Acta Oto-Laryngologica. – 2007. – v. 127. – P. 760-769.

13. Motokura T., Bloom T., Kim H.G., et al. A novel cyclin encoded by a bcl1-linked candidate oncogene// Nature. – 1991. – v. 350. – P. 512-515.

14. Muller D., Millon R., Lidereau R. et al. Frequent amplification of 11q13 DNA markers is associated with lymph node involvement in human head and neck squamous cell carcinomas // Eur J Cancer B Oral Oncol. – 1994. – v. 30B. – P. 113-20.

15. Pignataro L., Pruneri G., Carboni N. et al. Clinical relevance of cyclin D1 protein overexpression in laryngeal squamous cell carcinoma// Clin. Oncol. – 1998. – v. 16. – P. 3069-77.

16. Segas J.V., Lazaris A.C., Nikolopoulos T.P. et al. Cyclin D1 protein tissue detection in laryngeal cancer// ORL J Otorhinolaryngol Relat Spec. – 2005. – v. 67. – P. 319-25.

17. Vielba R., Bilbao J., Ispizua A. et al. p53 and cyclin D1 as prognostic factors in squamous cell carcinoma of the larynx// Laryngoscope. – 2003. – v. 113. – P. 167-72.

18. Zhang Y-Y., Xu Z-N., Wang J-X. et al. G1/S-specific Cyclin-D1 Might be a Prognostic Biomarker for Patients with Laryngeal Squamous Cell Carcinoma// Asian Pacific J Cancer Prev. – 2012. – v.13. – P. 2133-2137.

19. Zhi-Jie Fu, Zhi-Yong Ma, Qi-Rong Wang et al. Overexpression of CyclinD1 and underexpression of p16 correlate with lymph node metastases in laryngeal squamous cell carcinoma in Chinese patients// Clin Exp Metastasis. – 2008. – v. 25. – P. 887–892.


03.04.2013 19:08:00