Рак шейки матки (РШМ) многие годы занимает второе место по частоте среди злокачественных новообразований органов репродуктивной системы у женщин, уступая лишь раку молочной железы. Являясь наиболее частой онкогинекологической патологией, РШМ является серьезной проблемой здравоохранения не только в нашей стране, но и во всем мире [1]. В то же время согласно резолюции IX Всемирного конгресса по патологии шейки матки РШМ условно относится к полностью предотвратимым заболеваниям, в случае если выявляется на стадии предраковых заболеваний или начальной формы рака [2]. Реальной профилактикой цервикального рака является своевременное выявление и лечение предраковых заболеваний, к которым относятся цервикальные интраэпителиальные неоплазии(CIN).
В экономически развитых странах в результате активного внедрения цитологического скрининга достигнуто существенное снижение смертности от инвазивного рака шейки матки. Тем не менее, проблема ранней диагностики, прогноза и лечения CIN и РШМ по-прежнему остается актуальной проблемой современной медицины. К числу важных вопросов данной проблемы относится роль различных факторов, с которыми ассоциированы возникновение и прогрессия цервикальной интраэпителиальной неоплазии.
Основным этиологическим фактором развития CIN и РШМ является вирус папилломы человека (ВПЧ) «высокого онкогенного риска». В практически 99,7% материала биопсий, подтверждающих РШМ, выявляются различные типы ВПЧ [3].
Вирус папилломы человека относится к эпителиотропным вирусам, поражающим преимущественно базальный слой эпителия. Репликация вирусной ДНК и экспрессия ранних вирусных белков происходит в ядре эпителиальных клеток при их дифференцировке. Этот процесс оканчивается образованием зрелой вирусной частицы на последней стадии дифференцировки эпителиальной клетки.
Вирус способен существовать в свободной эписомальной и в интегрированной форме. Переход в интегрированную форму связан с включением вирусной дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) в геном человека. К злокачественной трансформации способна только интегрированная форма ВПЧ, при которой происходит неконтролируемая продукция двух ранних вирусных белков, являющихся онкогенами – Е6 и Е7. Эти белки взаимодействуют с эндогенными клеточными регуляторными белками p53 и pRb). Результатом этого взаимодействия является дизрегуляция цикла клеточной прогрессии, приводящая в дальнейшем цервикальному канцерогенезу [4]. Наибольший удельный вес прогрессирования диспластических процессов шейки матки, ассоциированных с ВПЧ-инфекцией, наблюдается при инфицировании вирусами типов 16 и 18 [5].
Однако далеко не всегда ВПЧ-инфекция развивается по описанному варианту и соответственно не всегда приводит к развитию рака шейки матки. По данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), при отсутствии отягощающих факторов в течение 3 лет поражения эпителия шейки матки, ассоциированные с ВПЧ, в 50-62% наблюдений подвергаются регрессии. По сведениям учёных Калифорнийского университета (США) у 70% молодых ВПЧ- инфицированных женщин ДНК ВПЧ перестаёт определяться на протяжении 24 мес.
К числу отягощающих факторов относятся такие факторы как раннее начало половой жизни, большое число половых партнеров, курение, злоупотребление алкоголем, возраст женщины. Среди эндогенных модифицирующих факторов в генезе малигнизации эпителия шейки матки наиболее важной представляется роль иммунной системы, в частности характер иммунного ответа при взаимодействии ВПЧ и макроорганизма.
Можно предположить, что ключевую роль играют локальные иммунные процессы, а именно цитокиновая регуляция локального иммунного ответа на ВПЧ. Нарушение данной регуляции, проявляющееся в преобладании противовоспалительных цитокинов над провоспалительными, возможно, повышает вероятность персистенции вируса в организме, что может способствовать формированию неопластических процессов. Интерлейкин-10 (ИЛ-10) является одним из основных иммунорегуляторных противовоспалительных цитокинов [6]. Полиморфизм гена ИЛ-10 G1082A влияет на производство ИЛ-10 in vivo и in vitro [7]. По данным Stanczuk GA, Sibanda EN, Perrey C et al. существует значимая связь полиморфизма G1082A гена ИЛ-10 с раком шейки матки [8], в то время как Zoodsma M, Nolte IM, Schipper M et al. сообщают об отсутствии такой связи [9]. Таким образом, корреляция полиморфизма гена ИЛ-10 с риском развития рака остается спорной.
Представляет интерес влияние ИЛ-10 на риск прогрессии от латентной формы ВПЧ до CIN.
Целью настоящего исследования является оценка частоты полиморфизма A1082G гена ИЛ-10 у женщин с латентной формой ВПЧ-ассоциированного поражения шейки матки (носительством ВПЧ), и женщин с CIN, ассоциированной с папилломавирусной инфекцией.
Материал и методы. В исследование вошли 120 женщин с ВПЧ-ассоциированным поражением шейки матки, которые были разделены на 2 группы с использованием метода «случай-контроль». В 1 группу были включены 60 женщин с латентной формой, во 2 группу - 60 женщин с CIN. Все женщины имели ВПЧ 16 типа.
Выделение форм ВПЧ-поражения выполнено на основании классификация ВПЧ-ассоциированных поражений нижнего отдела гениталий [10].
Диагноз CIN установлен на основании гистологического заключения согласно классификации Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ). Из 60 женщин с CIN у 21 женщины была CIN I, у 22 женщин - CIN II и у 17 женщин - CIN III. Диагноз латентной формы выставлен на основании отсутствия клинических, морфологических, цитологических изменений при наличии ДНК ВПЧ в клетках эпителия шейки матки.
ДНК вируса папилломы человека 16 типа определялась методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием типичных праймеров (L1C1/L1C2/ L1C2M) для области L1 вируса папилломы человека [11].
Для исследования полиморфизма гена ИЛ-10 использовалась венозная кровь, полученная утром натощак, по методике Perrey C, Turner SJ et al. [12].
Статистическая обработка произведена с использованием «Statistica 8.0». Результаты считались статистически значимыми при р<0,05.
У всех женщин, включенных в исследование, было получено Письменное информированное согласие на участие в исследовании.
Результаты и обсуждение. В ходе выполнения работы был выполнен анализ частоты полиморфизма G1082A гена ИЛ-10 у женщин с разными клиническими формами ВПЧ-инфекции.
При оценке частоты полиморфизма гена ИЛ-10 выявлена более высокая встречаемость аллеля G в положении 1082 у женщин с CIN (57%) в сравнении с женщинами с латентной формой ВПЧ-поражения (27%) (табл. 1). При этом гомозиготное состояние по G аллелю при CIN встречалось чаще, чем при латентной форме ВПЧ-инфекции (33% и 10%, соответственно, p<0,05). Гетерозиготное состояние было выявлено в 23% у женщин с CIN, что было выше, чем у женщин с латентной формой ВПЧ-инфекци (16,7%, p<0,05). (табл. 2).
Полиморфизм G1082A гена интерлейкина-10 включает в себя три генотипа AA, GA и GG, из которых генотип AA ассоциирован с низким синтезом ИЛ-10, в то время как генотипы GA и GG связаны с умеренной и высокой продукцией, соответственно [13].
Таблица 1. Частота мутации гена ИЛ-10 у женщин обследованных групп
Таблица 2. Частота вариантов полиморфизма гена ИЛ-10 у женщин обследованных групп
Интерлейкин-10 относится к группе противовоспалительных цитокинов и является ингибитором активности Т-хэлперов 1 типа (Th1-клеток). Он синтезируется Т-хэлперами 2 типа (Th2-клетками), моноцитами и цитотоксическими Т-клетками. Основная функция ИЛ-10 состоит в угнетении синтеза цитокинов Th1-клетками и в снижении активности макрофагов, в том числе продукции провоспалительных цитокинов. В то же время ИЛ-10 является синергистом ИЛ-4 и повышает синтез IgM и IgA.
Таким образом, ИЛ-10 является важным регулятором иммунного ответа, подавляющим активность макрофагов и Th1-клеток, в результате чего осуществляется цитотоксический ответ макроорганизма, а также обеспечивает реализацию некоторых биологических эффектов Th2-клеток, что способствует развитию гуморальной составляющей иммунного ответа, обусловливая аллергическую реактивность организма.
Но избыток ИЛ-10 ведет к снижению противоинфекционной защиты и развитию хронических инфекций.
Также полагают, что ИЛ-10 способствует стимуляции опухолевого роста в результате ингибирования T-клеточного иммунного ответа [14].
Кроме исследованного полиморфизма имеется ряд полиморфизмов, также связанных с единичными нуклеотидными заменами в гене ИЛ - 10. Наиболее хорошо из них изучены полиморфизмы промоторной области гена, такие как C-819Т (транзиция) и C-592A (трансверсия).
Таким образом, учитывая тот факт, что генотип AA ассоциирован с низким синтезом ИЛ-10, а генотипы GA и GG связаны с умеренной и высокой продукцией, соответственно, можно ожидать снижения иммунологической защиты на локальном уровне при наличии мутации в гене ИЛ-10 в результате повышения его концентрации в цервикальной слизи, и как следствие - повышение частоты развития неоплазий шейки матки.
Заключение. На основании полученных данных можно предположить, что генный полиморфизм G1082A ИЛ-10 может служить маркером генетической предрасположенности к формированию и прогрессированию CIN на фоне инфицирования ВПЧ.
Изучение взаимосвязи между генными полиморфизмами ключевых цитокинов локального иммунного ответа в шейке матки и установление связи с развитием CIN и рака шейки матки может позволить понять механизмы персистенции ВПЧ и иммунологического контроля над вирусом при его внедрении в эпителий. А в дальнейшем эта взаимосвязь позволит разработать и внедрить в клиническую практику более совершенные скрининговые мероприятия для выявления женщин с высоким риском развития CIN и рака шейки матки.