Актуальность. Опасность дисбиотических состояний влагалища, достигающая по данным Минздрава РФ среди женщин молодого репродуктивного возраста 33-54%, способствует развитию эндометрита, уретрита, аднексита, преждевременного прерывания беременности, снижает репродуктивное здоровье, не позволяя женщине реализовать свою основную биологическую функцию – деторождение [1,2].
К воспалительным нарушениям микроэкологии влагалища можно отнести кандидозный вульвовагинит, неспецифический вагинит и бактериальный вагиноз [9], который занимает лидирующие позиции, составляя 30-90% всех инфекционных поражений влагалища и проявляет тенденцию к росту. В то же время бактериальный вагиноз протекает бессимптомно у 15-38% женщин [3].
Согласно клинико-морфологическим исследованиям последних лет, к особенностям нарушения репродуктивного здоровья, являющимся прямым следствием бактериального вагиноза, относятся наличие хронического эндометрита (ХЭ) (в 100% случаев), хронического сальпингоофорита (в 52,3%), фоновых и предраковых заболеваний шейки матки (в 50,8%), cиндрома потери плода (в 23,1%), бесплодия (в 33,8%) [1,6].
Вагинальная инфекция в современном обществе возникает в связи с нарушениями общего и местного иммунитета по причине ухудшения экологической обстановки, неправильного питания, хронических стрессов и перенапряжений, она также связана с бесконтрольным применением лекарств, в особенности, антибиотиков и др. [7, 10].
В основе лечения неспецифических воспалительных заболеваний женских половых органов лежит комплекс этиотропной и патогенетической терапии: ликвидация возбудителей и восстановление биоценоза влагалища. В настоящее время терапия воспалительных заболеваний женских половых органов проводится с помощью антибиотиков широкого спектра действия. К побочным действиям антибиотиков можно отнести: иммунодепрессивное и аллергизирующее действие, подавление репаративных процессов, а также появление устойчивых к антибиотикам штаммов.
Таким образом, проблема профилактики и лечения воспалительных заболеваний женских половых органов остается весьма актуальной, так как во многих случаях заболевание протекает бессимптомно, методы лечения недостаточно эффективны, а количество больных женщин неуклонно повышается.
Препарат Хитозан на «Абисибе» - биологически активное вещество природного происхождения имеет широкий спектр действия, гораздо менее токсичен по сравнению с химическими веществами.
Хитозан, выделенный из панциря крабовых, обладает следующими свойствами: антимикробные, сорбционные, детоксицирующие, антиоксидантные.
Абисиб - водный экстракт пихты сибирской, имеет бактерицидные, противовоспалительные, гемо- и иммуностимулирующие свойства, содержит ряд органических кислот, необходимых для растворения Хитозана.
Была проделана работа по определению антимикробного спектра действия Хитозана in vitro в отношении тест культур грампозитивных и грамнегативных микроорганизмов, спорообразующих бактерий и грибов рода Candida. В результате получены данные, что хитозан с Мм 18 kDa в концентрации 5% оказывал выраженный антимикробный эффект на грамнегативные, E.coli и Pseudomonas aeruginosa, и грампозитивные бактерии, Staphylococcus aureus, Streptococcus s pp., B.subtillis, но слабо воздействовал на Candida albicans [5, 8].
Имеются данные об изменении динамики проникновения хитозана в ткани и органы при его введении в настоях фитосборов, что усиливает адсорбционные, и комплексообразующие свойства хитозана, обусловливающие увеличение его антитоксического и антибактериального действия [4]. Таким образом, сделано предположение о повышении биологической активности хитозана при совместном его использовании с абисибом.
Цель исследования: оценить влияние хитозана на микрофлору влагалища женщин репродуктивного возраста, страдающих неспецифическими воспалительными заболеваниями половых органов.
Материалы и методы. Обследовано 25 женщин репродуктивного возраста (18–45 лет), ведущих активную половую жизнь, находящихся на госпитализации в гинекологическом отделении роддома №4 г. Твери. Критерии включения в исследование: добровольное согласие женщин, наличие неспецифических воспалительных заболеваний половых органов, отсутствие беременности. В группу контроля вошли 30 практически здоровых женщин, проходящих плановый профилактический осмотр и не имеющих заболеваний гинекологического профиля. Материалом для исследования служило содержимое влагалища у всех обследуемых женщин. У пациентов гинекологического отделения материал собирался до и на третий день после окончания лечения 2% раствором Хитозана.
Для коррекции воспалительных процессов женских половых органов был использован 2% раствор Хитозана. Пищевой кистоторастворимый хитозан с молекулярной массой 200-300 Kd, растворенный в виде 2% раствора на экстракте сибирской пихты (Абисиб), содержащей аскорбиновую кислоту (pH=3) в качестве растворителя. Производится ЗАО «Биопрогресс», г. Щелково, Московская обл. по лицензии НИИ биологии и биофизики при Томском государственном университете (Регистрационное удостоверение МЗ РФ Р №001124/01-2002 ФСП 42-0254-1049-01. Сертификат соответствия № РОСС RU.ФМ04.А93328 от 14.06.2005). Препарат вводили в течение 7 дней, 1 раз в день по 2 мл раствора с помощью спринцевания влагалища перед сном, далее марлевый тампон, смоченный в 2 мл Хитозан на «Абисибе», вставляли внутривагинально на ночь.
Забор материала производился стерильным ватным тампоном с поверхности влагалища и доставлялся в бактериологическую лабораторию в течение 1-2 часов. Из материала готовили серийные разведения в изотоническом растворе хлорида натрия из расчета 10:1(объем/вес) и затем по 0,1 мл высевали на различные селективные питательные среды (ЖСА, Сабуро, МРС агар, кровяной МПА и кровяной ShaedlerAgar). Культивирование осуществляли соответственно в аэробных и анаэробных условиях с использованием анаэростата и газогенераторных пакетов Gas Рас PlusTM (ВВLTM). Культуры выдерживались в этих условиях 24–72 часа при температуре 37°С. Морфологические и тинкториальные свойства микроорганизмов изучали, пользуясь программно-аппаратным комплексом Диаморф Цито (увеличение 1:1000 с использованием бинокулярного микроскопа «Биолам»). Биохимическую идентификацию микроорганизмов проводили с помощью идентификационных API систем (bioMérieuxVitek, Inc.) и программного обеспечения APIWEB. Количество бактерий определяли путём подсчёта колониеобразующих единиц на 1 мл суспезии (lg КОЕ/мл).
Результаты исследования и их обсуждение. В результате было отобрано 25 женщин репродуктивного возраста (18–45 лет), поступивших на госпитализацию в гинекологическое отделение роддома № 4 г. Твери со следующими диагнозами: кольпит (у 60% женщин), хронический эндоцервицит (у 20% женщин), хронический аднексит (у 20% женщин).
У здоровых женщин и пациенток гинекологического профиля был выделен широкий спектр микроорганизмов. В результате проведенного исследования из влагалища женщин репродуктивного возраста было выделено 12 родов микроорганизмов: Lactobacillus, Bifidobacterium, Bacillus, Micrococcus, Peptococcus, Peptostreptococcus, Staphylococcus, Streptococcus, Gardnerella, Corynebacterium, E.coli и дрожжевые грибы рода Candida.
У пациенток гинекологического профиля чаще всего (90% случаев) выделялись микроорганизмы рода Streptococcus, менее часто (24-44%) – родов Lactobacillus, Bacillus, Micrococcus, Peptococcus, Peptostreptococcus, Staphylococcus (включая Staphylococcus aureus), и дрожжевые грибы рода Candida; реже (8-12%) – бактерии рода Gardnerella и семейства Enterobacteriaceae. У здоровых женщин в основном (30-60% случаев) выделялись микроорганизмы родов Streptococcus, Staphylococcus, Lactobacillus и Bacillus, менее часто (5-20%) – представители семейства Enterobacteriaceae и родов Peptococcus, Peptostreptococcus, Corynebacterium и Candida. Стафилококки, обладающие факторами патогенности, микрококки и гарднереллы отсутствовали (рис.1).
Рис. 1. Микрофлора влагалища пациенток гинекологического профиля и здоровых женщин.
У пациенток гинекологического профиля количество индигенных лактобацилл составило 2,48 lg КОЕ/мл, кишечная палочка встречалась в количестве 2,52 lgКОЕ/мл. Условно-патогенные микроорганизмы обнаруживались в количестве: золотистый стафилококк - 2,02 lg КОЕ/мл, дрожжевые грибы рода Candida - 2,81 lg КОЕ/мл, бациллы - 4,47 lg КОЕ/мл, гарднереллы – 3,6 lg КОЕ/мл. У здоровых женщин количественно преобладают индигенные лактобациллы (3,1 lg КОЕ/мл) и кишечная палочка (2,9 lg КОЕ/мл). В меньшем количестве встречаются условно-патогенные микроорганизмы: дрожжевые грибы рода Candida - 1 lg КОЕ/мл, бациллы – 2,1 lg КОЕ/мл, отсутствуют гарднереллы и золотистый стафилококк (рис. 2).
Рис. 2. Среднее количество микроорганизмов влагалища пациенток гинекологического профиля и здоровых женщин.
У женщин с неспецифическими воспалительными заболеваниями половых органов после применения хитозана, растворенного на «Абисибе», частота встречаемости постоянно обитающих бактерий, составляющих индигенную нормофлору влагалища, увеличилась: у лактобацилл - с 44% до 68%, у бифидобактерий – с 24% до 36%. Также наблюдалось колебание транзиторных условно-патогенных микроорганизмов в сторону увеличения их распространенности: пептострептококков – с 44% до 56%; либо снижения - золотистого стафилококка и дрожжевых грибов рода Candida - с 32% до 12%, бацилл с 44% до 40%. До лечения в 8% случаев были обнаружены микроорганизмы рода Gardnerella, а после лечения хитозаном данный микроорганизм не выявлялся (рис. 3).
Рис. 3. Частота встречаемости микроорганизмов влагалища женщин гинекологического профиля до и после применения хитозана, n=25.
Выявлено, что количество индигенных лактобацилл и бифидобактерий после лечения увеличилось с 2,48 и 4,3 lg КОЕ/г до 2,53 и 4,41 lg КОЕ/мл соответственно. Обнаружено снижение количества транзиторных условно-патогенных микроорганизмов: золотистого стафилоккока - с 2,02 до 0,23 lg КОЕ/мл, дрожжевых грибов рода Candida - с 2,81 до 2.39 g КОЕ/мл, бацилл - с 4,47 до 1.94 lg КОЕ/мл (рис. 4).
Рис. 4. Среднее количество микроорганизмов влагалища женщин гинекологического профиля до и после применения хитозана, n=25.
Заключение. У обследованных женщин репродуктивного возраста после применения хитозана, растворенного на «Абисибе», отмечается повышение частоты встречаемости и количества аутохтонных лактобацил и бифидобактерий, составляющих нормальную микрофлору влагалища и обеспечивающих колонизационную резистентность генитального тракта. Распространенность и количество представителей условно-патогенной микрофлоры значительно снизились на фоне лечения. Применение хитозана, растворенного на «Абисибе», позволяет быстро восстановить физиологический микробиоценоз влагалища за счет индигенных микроорганизмов. На основании результатов полученного исследования хитозан может быть рекомендован в комплексной терапии неспецифических воспалительных заболеваний женской репродуктивной системы.