Актуальность. Th2-лимфоциты («тимусные», «происходящие из тимуса») – клетки иммунной системы, участвующие в большинстве вариантов иммунного ответа как клеточного, так и гуморального типа. Они вырабатывают, прежде всего, противовоспалительные цитокины IL-4 и IL-10 под действием TNF-α, IFN-α, IL-1, IL-2, IL-3, IL-6, IL-12, IL-15 и других провоспалительных цитокинов [10].
Цитокины Th2-лимфоцитов (IL-4 и IL-10) представляют собой белки с молекулярной массой 15-36 кДа. Основная функция IL-4 и IL-10 состоит в изменении иммунного ответа с Th1 на Th2, что приводит к превращению В-лимфоцитов в плазматические клетки, которые секретируют антитела [3]. IL-4 и IL-10 - мощные противовоспалительные и иммуносупрессивные факторы, ингибирующие избыточный синтез провоспалительных цитокинов, таких как IL-1β, IL-2, IL-6, IL-8, IL-12, TNF-α, IFN-γ, IFN-α, активированными макрофагами и Тh1-лимфоцитами, что приводит к ослаблению избыточного влияния медиаторов воспаления на организм человека и к одновременной активации гуморального ответа организма, выражающейся в прогрессивном повышении секреции Ig E и Ig G [4, 10].
В связи с тем, что в норме в организме человека существует баланс между активностью Th1- и Th2-лимфоцитов, в результате которого поддерживается гомеостаз между различными системами организма: иммунной, кроветворной, нервной, эндокринной и др. [3, 11] –, именно дизрегуляцией цитокинопосредованных механизмов кооперации Т-лимфоцитов исследователи в настоящее время объясняют причину утяжеления клинической картины различных заболеваний как инфекционной, так и неинфекционной природы, особенно с неблагоприятным исходом [4].
Проведенные к настоящему времени исследования роли цитокинов, вырабатываемых Th2-лимфоцитами, при аденовирусной инфекции (АДВИ) достаточно фрагментарны и нередко противоречивы. Однако многие учёные [1, 3, 12, 13] указывают на их исключительную важность в патогенезе ОРВИ, особенно при тяжёлом течении, а также ведущую роль Th2-лимфоцитов, вырабатывающих IL-4 и IL-10, в ограничении гиперреакции иммунокомпетентных клеток. Так, повышенный уровень Th2-цитокинов (IL-4, IL-10) был зарегистрирован в носоглоточной слизи детей раннего возраста с тяжёлым, но благоприятным течением респираторно-синцитиальной вирусной инфекции [12]. Повышение уровня IL-10 в периферической крови было выявлено у больных как среднетяжёлым течением гриппа А/H1N1/2009, так и с тяжёлым течением заболевания с развитием острого респираторного дистресс-синдрома. У той же группы больных со среднетяжёлым течением гриппа А/H1N1/2009 не было отмечено статистически достоверных различий уровня IL-4 в периферической крови с контролем, однако было выявлено повышение его концентрации у больных с тяжёлой формой заболевания с развитием острого респираторного дистресс-синдрома [13]. Повышение концентрации IL-4 в сыворотке крови было определено у больных АДВИ [1], в тоже время, мы не встретили работ по изучению концентрации IL-10 в системном кровотоке больных АДВИ.
В связи с малочисленностью работ по изучению основных противовоспалительных цитокинов при АДВИ, целью настоящей работы явилось исследование в динамике уровня основных Th2-лимфокинов: IL-4 и IL-10 – в крови больных АДВИ.
Материалы и методы исследования. Под нашим наблюдением находилось 16 больных АДВИ средней тяжести в возрасте 15-54 лет, у которых заболевание протекало благоприятно, без осложнений. Диагноз был подтверждён с помощью реакции непрямой гемагглютинации (выявлением специфических антител с ростом их титра в 4 и более раза) или метода флюоресцирующих антител (исследовали соскоб из носоглотки).
Степень тяжести АДВИ оценивали преимущественно по выраженности интоксикационного и катарального синдромов, наличия лимфаденопатии, гепатолиенального синдрома. Заболевание во всех случаях начиналось остро, температура тела повышалась в пределах 38–40°С, симптомы интоксикации и катаральные явления были умеренно выражены. Длительность лихорадочного периода составляла 5-7 дней.
Забор крови для определения уровня цитокинов производили в остром периоде (1-2 день болезни) и периоде ранней реконвалесценции (на 7-9 день болезни). Уровень цитокинов определяли в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа коммерческими тест-системами "Вектор-Бест", Россия [6].
Результаты клинических и лабораторных исследований были внесены в специально разработанные карты индивидуального обследования пациентов с последующим представлением в виде электронных таблиц Microsoft Excel 2007. Статистическая обработка результатов исследований была проведена с использованием пакета StatGraphics 15.0.
В связи с тем, что содержание IL-4 и IL-10 в крови большинства пациентов находились ниже порога чувствительности метода лабораторного анализа [6], выборки с результатами лабораторных исследований имели “0” в значительной части позиций. Это обстоятельство привело к нулевому значению оценки медианы (Ме = 0) и невозможности сравнения выборок по данному параметру [2]. C учётом того, что содержание IL-4 и IL-10 в крови пациентов было распределено по экспоненциальному закону (в связи с выполнением критерия экспоненциальности распределения Шапиро-Уилка [2]), в качестве точечной оценки характеристики центра группирования значений данных факторов мы использовали выборочное среднее (Mo) [2, 5, 6].
Между собой выборки сравнивали с помощью непараметрических критериев: Вилкоксона-Манна-Уитни – рангового критерия, хорошо приспособленного для анализа малых выборок и робастного к виду закона их распределения, а также двухвыборочного критерия Колмогорова-Смирнова [2, 5].
Уровень значимости при проверке всех статистических гипотез – р ˂ 0,05 (доверительная вероятность > 0.95).
Контролем служила кровь 18 здоровых доноров в возрасте 19-40 лет. Полученные нами значения цитокинов у контрольной группы лиц полностью согласуются с выборочными средними показателями, полученными при обследовании сыворотки крови 68 здоровых доноров фирмой-производителем тест-систем "Вектор-Бест" (табл. 1)
Таблица 1. Концентрация цитокинов в сыворотке крови здоровых доноров (согласно настоящему исследованию и данным "Вектор-Бест")
Результаты. Сравнительная характеристика динамики концентрации исследованных цитокинов в остром периоде и в периоде реконвалесценции сыворотки крови больных АДВИ представлена в табл. 2.
Таблица 2. Сравнительная характеристика концентрации цитокинов, вырабатываемых Th2-лимфоцитами, в сыворотке крови больных АДВИ
Примечания: *- достоверные различия показателей в динамике заболевания (р≤0,05); # – достоверное отличие от контроля (р≤0,05); n – число обследованных пациентов.
В остром периоде АДВИ выявлено достоверное повышение концентрации всех исследованных цитокинов: IL-4 в 4,5 раз и IL-10 в 5 раз, что свидетельствует о значительной активации эффекторных клеток крови, синтезирующих данные белки. В последующем (в периоде реконвалесценции) выявлено прогрессивное снижение концентрации IL-10, однако его уровень всё равно был статистически значимо выше контрольных значений (р<0,05). В то же время отмечен ещё больший рост концентрации IL-4 (р<0,05).
Выводы. В связи с преобладающим местным (дистантным), а не системным действием исследованных цитокинов, быстрым разрушение и/или связыванием их со специфическими рецепторами (в течение 10-15 минут) –, все это обусловливает то, что их концентрация в периферической крови недостаточно информативно отражает те процессы, которые происходят в зоне воспаления. Однако трудности исследования активности Th2-клеток по синтезу IL-4 и IL-10 в месте воспаления обусловливает необходимость поиска косвенных признаков, характеризующих реакции по ограничению протекания воспалительной реакции и одновременную активацию гуморального звена иммунитета, в которой данные цитокины играют ключевую роль.
Выявленные изменения уровня IL-4 и IL-10 свидетельствуют о значительной активации Th2-клеточного звена иммунитета при АДВИ уже с самого начала заболевания. Данный факт подтверждается также сохранением высокой концентрации исследованных цитокинов к периоду реконвалесценции и прогрессивным повышением уровня IL-4 в течение заболевания, что связано с его активным участием в усилении гуморального звена иммунитета в виде активации выработки иммуноглобулинов, прежде всего, Ig G.
Заключение. Определено прогностическое значение уровня цитокинов, вырабатываемых Th2-лимфоцитами, в сыворотке крови больных АДВИ. Исходя из полученных в результате исследования данных, высокая концентрация в остром периоде IL-4 и IL-10 (с сохранением высокого уровня к периоду реконвалесценции), в какой-то мере, свидетельствует о сохранении клеточного баланса (активности Th1- и Th2-лимфоцитов) и, как следствие, в том числе и о благоприятном течении заболевания. Полученные данные о состоянии основных факторов цитокиновой сети в норме и у больных АДВИ были использованы нами при разработке следующих экспертных систем: «Экспресс-диагностика и прогноз течения ОРВИ», «Нарушения функционирования цитокиновой сети у больных ОРВИ» и «Рекомендации по лечению больных ОРВИ» [7-9].